Tooted

DNA aluste oksüdatiivne kahjustus põhjustab tavaliselt oksüdeeritud puriinide, eriti 7,8-dihüdro-8-oksoguaniini (8-oksoG) ja 7,8-dihüdro-8-oksoadeniini (8-oksoA) moodustumist, millest esimene on teadaolev mutageenne kahjustus.Kuna 8-oksoG on tavaliste alustega võrreldes kergesti edasisele oksüdatsioonile allutatud, uuriti in vitro aluse sisestamist DNA sünteesi ajal 8-oksoG oksüdeeritud vormi vastas.Sünteetilist matriitsi, mis sisaldas ühte 8-oksoG kahjustust, töödeldi esmalt erinevate üheelektroniliste oksüdeerijatega või üheelektrilise hapniku tingimustes ja seejärel viidi läbi praimeri pikendamine, mida katalüüsis Klenowi fragmendi ekso- (Kf exo-), vasika tüümuse DNA polümeraas alfa (pol-alfa). ) või inimese DNA polümeraas beeta (pol beeta).Kooskõlas eelmiste aruannetega sisestatakse dAMP ja dCMP valikuliselt 8-oksoG vastas kõigi kolme DNA polümeraasiga.Huvitaval kombel leiti, et 8-oksoG oksüdatsioon indutseerib dAMP ja dGMP sisestamise kahjustuse vastas Kf ekso- poolt, kusjuures modifitseeritud aluse kohas toimus praimeri pikendamise mööduv inhibeerimine.Lisaks moodustab kahjustus ploki DNA sünteesi ajal pol alfa ja pol beeta poolt.Katsed 8-oksoA-ga modifitseeritud matriitsi oligonukleotiidiga näitavad, et nii 8-oksoA kui ka 8-oksoA oksüdeeritud vorm sisestavad dTMP otse Kf exo-.8-oksoG-d sisaldavate oligonukleotiidide massispektromeetriline analüüs enne ja pärast IrCl62-ga oksüdeerimist on kooskõlas peamiselt 8-oksoG saidi oksüdatsiooniga, mille tulemusena moodustub peamise produktina guanidinohüdantoiini fragment.Abaassete kohtade moodustumise kohta tõendeid ei saadud.Need tulemused näitavad, et 8-oksoG oksüdeeritud vorm, võib-olla guanidinohüdantoiin, võib suunata DNA sünteesi ajal dNTP-de valesti lugemist ja valesti sisestamist.Kui selline protsess toimuks in vivo, oleks see punkt-mutageenne kahjustus, mis viib G-->T ja G-->C transversioonideni.Kuid 8-oksoA vastav oksüdeeritud vorm näitab peamiselt T õiget sisestamist DNA sünteesi ajal Kf ekso-ga.