Tooted

Töötasime välja uudse väikese segava RNA (siRNA) kohaletoimetamissüsteemi, kasutades polüetüleenimiini (PEI) ja y-polüglutamiinhappe (γ-PGA) kolmekomponentset kompleksi, millel oli vaigistav toime ja tsütotoksilisus puudub.siRNA binaarsed kompleksid PEI-ga olid osakeste suurusega ligikaudu 73-102 nm ja ζ-potentsiaal 45-52 mV.SiRNA / PEI komplekside vaigistav toime suurenes PEI suurenemisega ja siRNA / PEI kompleksid, mille laengusuhe oli suurem kui 16, näitasid olulist lutsiferaasi langust hiire käärsoole kartsinoomi rakuliinis, mis ekspresseeris regulaarselt lutsiferaasi (Colon26 / Luc rakud).Siiski täheldati siRNA / lipofektamiini kompleksis ja siRNA / PEI16 kompleksis tugevat tsütotoksilisust ja vere aglutinatsiooni.Teatati, et katioonsete komplekside laadimine anioonse ühendiga on paljulubav meetod nende toksilisuse ületamiseks.Seetõttu valmistasime siRNA kolmekomponentsed kompleksid PEI-ga (laenguaste 16), lisades γ-PGA, et vähendada tsütotoksilisust ja tarnida siRNA-d.Nagu oodatud, vähenes kolmekomponentsete komplekside tsütotoksilisus γ-PGA sisalduse suurenemisega, mis vähendas komplekside ζ-potentsiaali.Kolmekomponentsetes kompleksides, mis sisaldasid anioonse pinnalaenguga y-PGA-d, avastati tugev vaigistav toime, mis on võrreldav siRNA/lipofektamiini kompleksiga.Kolmekomponentsete komplekside kõrget inkorporeerimist Colon26 / Luc rakkudesse kinnitati fluorestsentsmikrokoopiaga.Pärast eksogeenselt transfekteeritud geeni hävitamist hinnati B16-F10 rakkudes kompleksi võimet vahendada endogeense majapidamisgeeni, glütseraldehüüdi 3-fosfaatdehüdrogenaasi (GAPDH) hävitamist.Kolmekomponentne kompleks (siRNA / PEI16 / γ-PGA12 kompleks) avaldas märkimisväärset GAPDH-i knockdown-efekti.Seega töötasime välja kasuliku siRNA kohaletoimetamissüsteemi.