Tooted

1. Metaboliitide profiilide koostamise meetodid on olulised vahendid metaboliitide kogumite mõõtmiseks bioloogilistes süsteemides.Kuigi enamik metaboliitide profiilide koostamise meetodeid kirjeldavad suhtelist intensiivsust või sõltuvad mõnest sisestandardist, mis esindavad kõiki metaboliite, on ülim nõue metaboliitide kogumi kvantitatiivseks kirjeldamiseks bioloogilistes rakkudes ja vedelikes absoluutse kontsentratsiooni määramine.Siin kirjeldame suure läbilaskevõimega ja tundliku gaasikromatograafia / tandem-massispektromeetria (GC / MS / MS) suunatud metaboliitide profileerimise meetodit, mis võimaldab kõigi tuvastatud metaboliitide absoluutset kvantifitseerimist.Meetod põhineb metüülkloroformiaadi derivatiseerimisel ja kvantifitseerimisel, lisades proove metaboliitide standarditele, mis on eraldi derivatiseeritud deutereeritud derivatiseerimisreagentidega.Traditsiooniline elektronide löökionisatsioon asendatakse positiivse keemilise ionisatsiooniga, kuna viimane säilitab palju suuremal määral molekuliooni ja teisi suure molekulmassiga fragmente.See hõlbustas ainulaadsete MS/MS üleminekute valimist paljude koelueeruvate metaboliitide hulgast.Praegu hõlmab uudne GC/MS/MS meetod 67 tavalist primaarset metaboliiti, millest enamik kuulub amino- ja mitteaminohapete rühma.Näitame meetodi rakendatavust uriini- ja seerumiproovidele.Meetod parandab oluliselt praegust metoodikat aminohapete ja mitteaminoorgaaniliste hapete GC/MS metaboliitide kvantitatiivseks profileerimiseks.

2,24S-hüdroksükolesterool (24OHC) ja 27-hüdroksükolesterool (27OHC) on kaks erineva päritoluga struktuurilt sarnast oksüsterooli – esimene moodustub peaaegu eranditult ajus ja teine ​​vähemal määral kui enamikus teistes elundites.TESTITAV HÜPOTEES: Neuronaalne kahjustus ja/või demüelinisatsioon põhjustab 24OHC voo suurenemist ajust tserebrospinaalvedelikku (CSF), samas kui defektne hematoentsefaalbarjäär põhjustab 27OHC voo suurenemist vereringest tserebrospinaalvedelikku. Isotoopide lahjendusmass spektromeetriat kasutati kahe oksüsterooli määramiseks tserebrospinaalvedelikus ja plasmas enam kui 250 erinevate neuroloogiliste ja geriaatriliste haigustega patsiendilt. Kahe oksüsterooli CSF-i taset mõjutasid erinevad haigused palju rohkem kui plasmatasemeid.Aktiivsete demüeliniseerivate haigustega patsientidel oli suurenenud 24OHC tase tserebrospinaalvedelikus suhteliselt kõrge 24OHC/27OHC suhtega.Meningiidiga patsientidel oli mõlema steroidi tase üldiselt kõrge madala 24OHC/27OHC suhtega.Alzheimeri tõvega patsientidel oli 24OHC tase tserebrospinaalvedelikus veidi suurenenud, kuid 27OHC tase oli väiksem.Sclerosis multiplex'iga patsientidel oli 24OHC kõrgem tase aktiivsetel perioodidel kõrge 24OHC/27OHC suhtega. Kahe oksüsterooli mõõtmine tserebrospinaalvedelikus ja plasmas võib oluliselt täiendada olemasolevaid neuroloogiliste haiguste hindamise biokeemilisi meetodeid.