Tooted

Gravesi orbitopaatia (GO) progresseerumisel on näidatud orbitaalsete fibroblastide diferentseerumist küpseteks adipotsüütideks ja sellele järgnevat rasvkoe akumuleerumist.Autofagia osaleb adipogeneesis, kuid autofagia rollist GO initsiatsioonis ja progresseerumises on vähe teada.Selle uuringu eesmärk on uurida autofagia rolli GO patogeneesis. Analüüsiti GO-ga patsientide ja normaalsete isikute orbitaalseid rasv-/sidekoeeksplantaate, samuti isoleeritud orbitaalseid fibroblaste.Adipogenees indutseeriti diferentseeriva söötme abil vesinikperoksiidiga või ilma ning autofagiat manipuleeriti bafilomütsiini A1 ja Atg5-sihitud lühikese juuksenõela RNA (shRNA) abil.Autofagosoomid tuvastati elektronmikroskoopia abil.Autofagiaga seotud geenide ekspressiooni ja adipogeneesiga seotud transkriptsioonifaktoreid analüüsiti reaalajas pöördtranskriptsiooni-polümeraasi ahelreaktsiooni ja/või Western blot analüüsiga.Lipiidide tilkade kogunemist uuriti Oil Red O värvimisega. Autofaagilisi vakuoole oli GO-rakkudes rohkem kui mitte-GO-rakkudes (p<0,05).Autofagiaga seotud geenide ekspressioon oli GO kudedes ja rakkudes oluliselt kõrgem kui nende mitte-GO kolleegides.Interleukiin-1β suurendas LC3-II, p62 ja Atg7 valku GO rakkudes.Autofagosoomide akumuleerumine ilmnes adipogeneesi 4. päeval ja vähenes 10. päevaks koos lipiidide tilkade moodustumisega.LC3 ja p62 valkude ekspressioon suurenes 48 tunni jooksul pärast diferentseerumist ja vähenes järk-järgult 4. päeval 10. Päeval. Bafilomütsiin A1 ravi ja Atg5 pärssimine shRNA poolt inhibeeris lipiidide tilkade akumulatsiooni ja pärssis adipogeensete markerite ekspressiooni. Autofagia suurenes GO kudedes ja rakkudes võrreldes mitte-GO koed ja rakud, mis viitab sellele, et autofagia mängib rolli GO patogeneesis.Autofagiaga manipuleerimine võib olla GO terapeutiline sihtmärk.