Tooted

Valkude fosforüülimine reguleerib raku erinevaid funktsioone ja mängib võtmerolli taimede varases arengus.Arabidopsise seemikute valgu fosforüülimise varasemate uuringute täiendamiseks ja laiendamiseks kasutasime alternatiivset lähenemisviisi, mis ühendab valgu ekstraheerimise mittedenatureerivates tingimustes puutumata fosfoproteiinide immobiliseeritud metalliioonafiinsuskromatograafia (IMAC) rikastamisega Rubisco-vaesestatud ekstraktides, millele järgneb identifitseerimine. kasutades kahemõõtmelist geelelektroforeesi (2-DE) ja vedelikkromatograafia-tandem-massispektromeetriat (LC-MS/MS).Geelisisene trüpsiini seedimine ja valitud geelilaikude analüüs tuvastas 144 fosforüülitud peptiidi ja jääki, millest PhosPhAt 4.0 ja P3DB Arabidopsis thaliana fosforüülimissaitide andmebaasides leiti ainult 18 fosfopeptiidi ja 8 fosfosiiti.Rohkem kui pooled 82 tuvastatud fosfoproteiinist olid seotud süsivesikute metabolismi, fotosünteesi/hingamise või oksüdatiivse stressi vastuse mehhanismiga.Intaktsete fosfoproteiinide rikastamine enne 2-DE-d ja LC-MS/MS-i näib parandavat fosforüülitud treoniini ja türosiini jääkide tuvastamist võrreldes meetoditega, mis kasutavad peptiiditasemel rikastamist, mis viitab sellele, et need kaks lähenemisviisi on fosforüülimiskoha katvuse osas mõnevõrra teineteist täiendavad.Võrreldes noorte seemikute tulemusi küpsete Arabidopsise lehtedega varem saadud tulemustega, tuvastati viis valku, mis on nendes kudedes erinevalt fosforüülitud, näidates selle tehnika potentsiaali valgu fosforüülimise dünaamika uurimiseks taimede arengu ajal.