Tooted

Beeta-D-2'-deoksü-2'-fluoro-2'-C-metüültsütidiin (PSI-6130) on C-hepatiidi viiruse (HCV) RNA sünteesi tugev spetsiifiline inhibiitor Huh-7 replikonirakkudes.HCV NS5B RNA polümeraasi inhibeerimiseks tuleb PSI-6130 fosforüülida 5'-trifosfaadi vormiks.Uuriti PSI-6130 fosforüülimist ja HCV NS5B inhibeerimist.PSI-6130 fosforüülimist inimese rekombinantse 2'-deoksütsütidiinkinaasi (dCK) ja uridiin-tsütidiinkinaasi 1 (UCK-1) poolt mõõdeti sidestatud spektrofotomeetrilise reaktsiooni abil.Näidati, et PSI-6130 on puhastatud dCK substraat, mille Km on 81 mikroM ja kcat 0, 007 s-1, kuid see ei olnud UCK-1 substraat.PSI-6130 monofosfaat (PSI-6130-MP) fosforüüliti vastavalt rekombinantse inimese UMP-CMP kinaasi ja nukleosiiddifosfaatkinaasi abil tõhusalt difosfaadiks ja seejärel trifosfaadiks.Uuriti metsiktüüpi ja muteerunud (S282T) HCV NS5B RNA polümeraaside inhibeerimist.PSI-61 30 trifosfaadi (PSI-6130-TP) püsiseisundi inhibeerimiskonstant (Ki) metsiktüüpi ensüümiga oli 4,3 mikroM.Sarnased tulemused saadi 2'-C-metüüladenosiintrifosfaadiga (Ki = 1,5 mikroM) ja 2'-C-metüültsütidiintrifosfaadiga (Ki = 1,6 mikroM).S282T mutatsiooniga NS5B, mis teadaolevalt annab resistentsuse 2'-C-metüüladenosiini suhtes, inhibeeris PSI-6130-TP sama tõhusalt kui metsiktüüpi.PSI-6130-MP lisamine RNA-sse, mida katalüüsis puhastatud NS5B RNA polümeraas, põhjustas ahela lõpetamise.