Tooted

LecA (PA-IL) on Pseudomonas aeruginosa poolt toodetud tsütotoksiline lektiin ja adhesiin, mis seob suure spetsiifilisuse ja afiinsusega hüdrofoobseid galaktosiide.Kasutades lecA-egfp translatsioonifusiooni ja biokile ekstratsellulaarse maatriksi immunoblotanalüüsi, näitame, et lecA ekspresseerub biokile kasvatatud rakkudes.Nii polüstüreeni kui ka roostevaba terase staatilistes biokile testides vähendati lecA mutatsiooni tõttu biokile sügavust ja pinnakatet ning suurenes LecA-d ületootvas tüves PAO-P47.Kasv isopropüül-beeta-D-tiogalaktosiidi (IPTG) või p-nitrofenüül-alfa-D-galaktosiidi juuresolekul pärssis ka biokile pinnakatet lähtetüve PAO-P47 poolt, kuid mitte teraskupongidel oleva lecA mutandiga. NPG).Lisaks saab nende hüdrofoobsete galaktosiidide puudumisel moodustunud küpseid metsiktüüpi biokilesid hajutada IPTG lisamisega.Seevastu p-nitrofenüül-alfa-L-fukoosi (NPF) lisamine, millel on kõrge afiinsus P. aeruginosa LecB (PA-IIL) lektiini suhtes, ei mõjutanud biokile moodustumist ega hajumist.P. aeruginosa PAO1 planktoni kasvu ei mõjutanud IPTG, NPG ega NPF olemasolu, samuti ei saanud tüvi neid suhkruid süsinikuallikatena kasutada, mis viitab sellele, et täheldatud mõjud biokile moodustumisele olid tingitud LecA-ligandi konkureerivast inhibeerimisest. siduv.Sarnased tulemused saadi ka teraskupongidel dünaamilise voolu tingimustes kasvatatud biokilede puhul, mis viitab sellele, et LecA aitab kaasa P. aeruginosa biokile arhitektuurile erinevates keskkonnatingimustes.

Arabidopsise taimede lehtedes on tuvastatud alfa-L-fukosidaas (EC 3.2.1.51), mis on võimeline vabastama ksüloglükaanoligosahhariidide kõrvalahelast t-fukosüüli jäägi.Veelgi enam, sarnase substraadi spetsiifilisusega alfa-L-fukosidaas puhastati kapsa (Brassica oleracea) lehtedest, et muuta SDS-PAGE-l üks riba.Sellest valguribast saadi kaks peptiidjärjestust ja neid kasutati Arabidopsise geeni tuvastamiseks, mis kodeerib alfa-fukosidaasi, mida soovitame nimetada AtFXG1-ks.Lisaks on leitud ka Arabidopsise geen, millel on homoloogia tuntud alfa-L-fukosidaasidega, ja tegime ettepaneku nimetada see AtFUC1-ks.Nii AtFXG1 kui ka ATFUC1 ekspresseeriti heteroloogselt Pichia pastoris'e rakkudes ja alfa-L-fukosidaasi aktiivsus sekreteeriti söötmesse.AtFXG1 poolt kodeeritud alfa-L-fukosidaas oli aktiivne ksüloglükaan XXFG oligosahhariidide, samuti 2'-fukosüüllaktitooli vastu, kuid mitte p-nitrofenüül-alfa-L-fukopüranosiidi vastu.Heteroloogiliselt ekspresseeritud AtFUC1 oli aga aktiivne ainult 2'-fukosüüllaktitooli vastu.Seega peab esimene olema seotud ksüloglükaani metabolismiga.