Tooted

Üle 70% madala kvaliteediga glioomidest kannab isotsitraatdehüdrogenaasi 1 (IDH1) kodeerivas geenis heterosügootset R132H mutatsiooni.See annab ensüümile uudse võime muundada α-ketoglutaraadi 2-hüdroksüglutaraadiks, mis viib lõpuks kasvaja tekkeni.2-hüdroksüglutaraadi tootmise peamine allikas on glutamiin, mis vähi korral on ka trikarboksüülhappe tsükli (TCA) anapleroosi allikas.Alternatiivne anapleroosi allikas on püruvaadi voog püruvaadi karboksülaasi (PC) kaudu, mis on tavalistes astrotsüütides tavaline rada.Selle uuringu eesmärk oli kindlaks teha, kas PC on TCA anapleroosi allikas IDH1 mutantsetes rakkudes, kus glutamiini kasutatakse 2-hüdroksüglutaraadi tootmiseks. Uuriti inimese immortaliseeritud normaalseid astrotsüüte, mis olid konstrueeritud ekspresseerima heterosügootset mutantset IDH1 või metsiktüüpi IDH1.Püruvaadi voog PC ja püruvaadi dehüdrogenaasi (PDH) kaudu määrati magnetresonantsspektroskoopia abil, et uurida [2-¹3C]glükoosist saadud ¹³C-märgisega led-glutamaadi ja glutamiini märgistust.Asjakohaste ensüümide ekspressiooni ja aktiivsuse uurimiseks kasutati aktiivsusanalüüse, RT-PCR-i ja Western blot analüüsi.Vähi genoomi atlase (TCGA) andmeid analüüsiti, et hinnata ensüümide ekspressiooni inimese glioomiproovides. Võrreldes metsiktüüpi rakkudega suurendasid mutantsed IDH1 rakud märkimisväärselt fraktsioneerivat voolu läbi PC.Seda seostati PC aktiivsuse ja ekspressiooni olulise suurenemisega.Samal ajal vähenes oluliselt PDH aktiivsus, mis on tõenäoliselt vahendatud PDH kinaasi 3 poolt märkimisväärselt suurenenud inhibeeriva PDH fosforüülimise tõttu. Kooskõlas rakkudes tehtud vaatlusega näitas TCGA andmete analüüs PC ekspressiooni olulist suurenemist mutantsetes IDH-d ekspresseerivates inimese glioomiproovides võrreldes metsikute glioomiproovidega. Meie tulemused näitavad, et muutused PC-s ja PDH-s võivad olla oluline osa raku kohanemisest IDH1 mutatsiooniga ja võivad olla potentsiaalsed terapeutilised sihtmärgid.