Tooted

Kolitsiini E1 kanali domeeni membraani topoloogiat uuriti fluorestsentsresonantsenergia ülekande (FRET) abil.FRET hõlmas doonoriks geneetiliselt kodeeritud fluorestseeruvat aminohapet (kumariini) ja FRET aktseptorina DABMI-ga (4-(dimetüülamino)fenüülasofenüül-4'-maleimiid) seotud selektiivselt märgistatud tsüsteiinijääki.Fluorestseeruv kumariinijääk inkorporeeriti valku ortogonaalse tRNA/aminoatsüül-tRNA süntetaasi paari kaudu, mis võimaldas selektiivselt inkorporeerida mis tahes kohta kolitsiini kanali domeenis.Iga variant sisaldas kumariini lisamiseks stoppmutatsiooni (TAG) ja DABMI kinnitamiseks tsüsteiini (TGT) mutatsiooni.Kuus interheliaalset kaugust heeliksites 1–6 määrati FRET analüüsi abil nii lahustuva kui ka membraaniga seotud oleku jaoks.FRET-i andmed näitasid suuri muutusi spiraalidevahelistes kaugustes heeliksite 3–6 vahel pärast membraani ühendamist, andes uue ülevaate kanali domeeni membraaniga seotud struktuurist.Üldiselt vähenes kumariini-DABMI FRET-i interheliline efektiivsus membraani sidumisel, tuginedes kolitsiini kanali vihmavarjumudelile.Praeguste ja varem avaldatud FRET-andmete põhjal töötati välja esialgne mudel kanali domeeni suletud oleku jaoks.Mudel soovitab heeliksite 1–7 ringikujulist paigutust päripäeva rakuvälisest küljest ja heeliksite 1, 6, 7 ja 10 membraanipindade ühendamist ümber tsentraalse transmembraanse juuksenõela, mille moodustavad heeliksid 8 ja 9.