Tooted

Fluorestseiini ja fluorestseiini metüülestri monogalaktopüranosiidid: süntees, ensümaatiline hüdrolüüs biotnüleeritud β-galaktosidaasi abil ja translatsiooni difusioonikoefitsiendi määramine

Fluorestseiini monoglükosiide (d-galaktopüranosiid (FMG) ja d-glükopüranosiid) ja nende metüülestrit (MFMG) on valmistatud atsetabromoglükoosist/galaktoosist ja fluorestseiini metüülestrist hea saagisega.Galakto derivaatide ensümaatilise hüdrolüüsi katsed (kasutades biotinüülitud β-galaktosidaasi) on läbi viidud ja arvutatud kineetilised parameetrid.Hüdrolüüsi käigus on täheldatud fluorestsentsi intensiivsuse 15–20-kordset suurenemist.Lühikese aja ja substraadi madala kontsentratsiooni korral on täheldatud fluorestsentsi lineaarset suurenemist, mistõttu on need ühendid kasulikud ja tundlikud galaktosidaaside jaoks.MFMG Michaelise – Menteni konstandi (Km) väärtuse suurus on kõrgem kui FMG väärtus, mis viitab fluorogeense substraadi võimalikule konformatsioonilisele muutusele.FMG-ga biotinüülitud β-Gal Km väärtus on madalam kui natiivse ensüümi oma.See tähelepanek näitab biotinüülitud ensüümi kõrgemat substraadi afiinsust võrreldes natiivse ensüümiga.Fluorestsentskorrelatsioonspektroskoopia abil on mõõdetud translatsiooni difusioonikoefitsiente nii fluorogeensete substraatide kui ka mõlema produkti jaoks.Fluorogeensete substraatide ja ensümaatiliste hüdrolüüsiproduktide translatsiooni difusioonikoefitsiendid on mõõdetud sarnaseks, vahemikus 3,5–4,5 × 10–10 m2 s–1.Seega ei ole substraadi ja produkti translatsioonilise liikuvuse erinevusest tingitud ensümaatilise kineetika paranemine või aeglustumine nii ilmne.